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TCEP盐酸盐使用说明

  • 分类:新闻中心
  • 作者:昊帆研发部
  • 来源:
  • 发布时间:2021-04-15 15:31
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【概要描述】

TCEP盐酸盐使用说明

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TCEP盐酸盐使用说明
 
产品描述

TCEP盐酸盐,1g;TCEP盐酸盐,10g;

分子量:286.65;CAS:51805-45-9。

 
储存方法

建议室温密闭保存、运输。

 
使用说明

TCEP盐酸盐是一种有效的、通用的、无臭的且不含硫醇的还原剂,广泛应用于蛋白质和其他涉及二硫键还原的研究(图1)。该产品在很多溶剂中有较好的溶解度和稳定性,还原二硫键的效果与DTT相似,但是又不像DTT或其他含硫还原剂必须在巯基交联反应前去除。

 

三烷基膦化合物还原蛋白质二硫键的能力和优点早已为人们所熟知[1][2],但由于在水中溶解度差以及难闻的气味导致应用较少。磷酸盐在水溶液中较稳定,可以选择性断裂二硫键,并且对其他官能团几乎没有作用[2],三(2-羧乙基)膦(TCEP)的发现克服了三烷基膦化合物的缺点从而被广泛应用[3]

 

TCEP在较宽的pH范围可以选择性地、彻底地还原在水中稳定的烷基二硫化合物[4],室温条件下还原甚至不到5分钟。TCEP没有挥发性、无刺激性气味,也不像其他大部分还原剂在空气中易被氧化。与DTT相比,TCEP更稳定、活性更强,并且可以在低pH值时还原二硫键[5]

 

图1 TCEP还原有机二硫键

 

 

产品信息

1. 溶解度

TCEP盐酸盐(分子量:286.65)在水中有很好的溶解度,可达到310g/L(1.08M)。作为亲水性化合物,在水缓冲液中TCEP几乎在任何pH下都有非常好的溶解性,因此在大部分水缓冲液中的反应浓度和10X的存储液很容易制备。TCEP在有机溶剂中有较小溶解度的只有甲醇和乙醇。

 

2. 在溶液中稳定性

TCEP在水、酸和普通溶液中非常稳定,溶于水中的pH约为2.5。研究指出,室温下TCEP在100mM HCl或100mM NaOH溶液中放置24小时无变化,同样在如下50mM缓冲液中也无变化:Tris•HCl(pH 7.5, 8.5和9.5)、HEPES(pH6.8和8.2)、硼酸盐缓冲液(pH8.2和10.2)和CAPS(pH9.7和11.1)[5],甚至TCEP在这些缓冲液中三周,被氧化部分也少于20%。

 

TCEP在磷酸盐缓冲液中并不是特别稳定,尤其是在中性pH条件下。实验指出在pH值为7.0的0.35M磷酸盐缓冲盐(PBS)中72小时内被完全氧化,与在pH值为8.0的0.15M PBS中约50%被氧化的时间相同。只有在pH>10.5或<6.0的PBS中,TCEP才只发生轻微氧化。因此,如果在PBS缓冲液中使用TCEP,最好现配现用。

 

3. 还原活性的pH范围

TCEP可以在较宽的pH范围有效的还原二硫键[5],实验表明TCEP在1.5<pH<9.0之间,30秒内即可完全还原2,2′二硫代二吡啶(2,2′-DTDP),但在pH>9时,只有50%的2,2′-DTDP被还原。在pH<8.0时,TCEP比DTT效果更好,甚至可以还原被氧化的DTT[5]

 

4. 反应浓度

对于大多数反应,室温下5-50mM TCEP可以提供足够的摩尔浓度在几分钟内有效还原肽或蛋白质的二硫键。pH在1.5-8.5之间时,30µM的TCEP可以在40秒内将2,2′-DTDP(20µM) 完全还原[5]。当使用等摩尔量的TCEP时反应时间将延长很多,Mery报告显示TCEP与二硫化合物摩尔比1:1时,反应时间将近一小时[6]

 

5. 使用兼容性

因为TCEP不含硫醇,因此不需要在马来酰亚胺标记或交联反应前去除。大多数情况下,TCEP浓度小于10-20mM时,与马来酰亚胺的化学反应也是可以兼容的。

 

TCEP(50mM)可以替代DTT或2-巯基乙醇作为SDSPAGE的还原样品缓冲液,然而因为TCEP在溶液中带电荷,所以不适合二维等电聚焦电泳(IEF)。

 

一种标记抗体的策略是减少IgG分子铰链区的二硫键,而不需要另外的标记减少重链和轻链之间的连接,这种“部分”还原通常用2-巯基乙胺(2-MEA)完成。Bläuenstein等人[7]证明了TCEP有如下作用:将最终浓度为3.8-4.0mM的TCEP加到含有10mg/mL IgG的0.1M磷酸盐缓冲液(pH 4.6-7.5)中,在室温下反应20-30分钟,然后使用脱盐柱去除TCEP产物。

 

参考文献:

1. Ruegg, U.T. and Rudinger, J. (1977). Reductive cleavage of cystine disulfides with tributylphosphine. Methods Enzymol 47:111-26. 

2. Kirley, T.L. (1989). Reduction and fluorescent labeling of cyst(e)ine-containing proteins for subsequent structural analysis. Anal Biochem 180:231. 

3. Burns, J.A., et al. (1991). Selective reduction of disulfides by tris-(2-carboxyethyl)-phosphine. J Org Chem 56:2648-50. 

4. Levison, M.E., et al. (1969). Reduction of biological substances by water-soluble phosphines: Gamma-globulin. Experentia 25:126-7. 

5. Han, J.C., et al. (1994). A procedure for quantitative determination of tris(2-carboxyethyl)phosphine, an odorless reducing agent more stable and 

effective than dithiothreitol. Anal Biochem 220:5-10. 

6. Mery, J., et al. (1993). Disulfide linkage to polyacrylic resin for automated Fmoc peptide synthesis. Immunochemical applications of peptide resins and 

mercaptoamide peptides. Int J Peptide Protein Res 42:44-52. 

7. Blauenstein, P., et al. (1995). Experience with the iodine-123 and technetium-99m labeled anti-granulocyte antibody Mab47: a comparison of labeling methods. Eur J Nuclear Med 22:690-8.

 

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