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N-乙基马来酰亚胺(NEM)产品介绍

  • 分类:新闻中心
  • 作者:昊帆研发部
  • 来源:
  • 发布时间:2021-06-17 15:21
  • 访问量:

【概要描述】

N-乙基马来酰亚胺(NEM)产品介绍

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产品描述
分子量:125.13

结构式:

储存方法:-20℃保存,运输时使用冰袋保持低温。

产品介绍:N-乙基马来酰亚胺(NEM)是一种烷基化试剂,与巯基反应生成稳定的硫醚键。在pH值6.5-7.5时,马来酰亚胺反应对巯基具有特异性;在pH值>7.5时,马来酰亚胺则与胺基发生反应。马来酰亚胺基团会通过亲核攻击一个双键碳上的硫醇盐阴离子与巯基反应,当足够的巯基被封闭时,随着双键成为单键,可以通过测量300nm 处的吸光度下降来监测反应。产生的硫醚基具有非可逆性且在乙基终止,封闭或遮盖巯基。

 

封闭蛋白质上巯基的程序

 

NEM在pH6.5-7.5之间与巯基反应形成稳定的硫醚键,在pH值>7.5时,与伯胺的反应性和马来酰亚胺基水解均可发生。

 

A. 所需材料

1. 含有0.1M磷酸盐、0.15M氯化钠的磷酸盐缓冲盐水(PBS);pH7.2(PBS)或其他pH为6.5-7.5的无胺缓冲液;

2. 去除多余的NEM装置,例如玻片分析仪透析盒,迷你型滑盖式透析盒或者离心脱盐柱。

 

B. 对蛋白质的巯基封闭作用

1. 在开启NEM前先恢复至室温,以防在瓶内凝固和水解而丧失活性;

2. 将蛋白质溶解于反应缓冲液中配成1-10mg/mL;

3. 用高纯水制备100-200mM的NEM,加入至少10倍摩尔量的NEM来封闭巯基,或者向蛋白质中加等量的NEM(例如,将2mg NEM加到1mL、2mg/mL蛋白质中);

注:NEM需现配现用,防止水解。

4. 在室温下反应2小时;

5. 被封闭的蛋白质透析或脱盐除去NEM。

 

问题解答

 

 

 

参考文献:

1. Smyth, D.G., et al. (1960). Reactions of N-ethylmaleimide. J Am Chem Soc 82:4600-4. 

2. Heitz, J.R., et al. (1968). Inactivation of yeast alcohol dehydrogenase by N-alkylmaleimides. Arch Biochem Biophys 127:627-8. 

3. Gorin, G., et al. (1966). Kinetics of the reaction of N-ethylmaleimide with cysteine and some congeners. Arch Biochem Biophys 115:593-7. 

4. Partis, M.D., et al. (1983). Cross-linking of protein by ω-maleimido alkanoyl N-hydroxysuccinimido esters. J Protein Chem 2:263-77. 

5. Brewer, C.F. and Riehmn, J.P. (1967). Evidence for possible nonspecific reactions between N-ethymaleimide and proteins. Anal Biochem 18:248-55. 

6. Haugaard, N., et al. (1981). Use of N-ethylmaleimide to prevent interference by sulfhydryl reagents with the glucose oxidase assay for glucose. Anal Biochem 116:341-3.

 

 

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